细胞侵袭实验概述

细胞侵袭实验是用于研究细胞侵袭能力的一种实验方法，通常用于肿瘤细胞研究，以评估肿瘤细胞穿透基底膜和侵袭周围组织的能力。细胞侵袭实验是研究肿瘤细胞侵袭转移机制的重要工具，通过这种实验可以筛选出影响细胞侵袭的分子靶点，为开发抗肿瘤药物提供依据。

基质胶侵袭实验

1. 实验原理：

基质胶是一种从 Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) 小鼠肉瘤中提取的富含层粘连蛋白、胶原蛋白IV和巢蛋白的胶状物质，它可以模拟细胞外基质和基底膜的结构。肿瘤细胞在趋化因子的作用下，通过分泌蛋白酶降解基质胶，从而穿过人工基底膜。

2. 实验步骤：

①准备基质胶：

将基质胶在4°C过夜解冻，然后在冰上稀释到适当的浓度。

将稀释后的基质胶铺在Transwell小室的聚碳酸酯膜上，放入培养箱中孵育，使其凝固形成基底膜。

②细胞准备：

将细胞培养至对数生长期，然后进行胰蛋白酶消化，制备成单细胞悬液。

对细胞进行计数，并用无血清培养基重悬细胞至所需的浓度。

③接种细胞：

将细胞悬液加入到Transwell小室的上室，下室加入含有趋化因子的完全培养基。

④侵袭实验：

将Transwell小室放入培养箱中，孵育一定时间（通常为24-48小时）。

⑤固定和染色：

孵育时间结束后，取出小室，用棉签轻轻擦去上室未侵袭的细胞。

用甲醛固定侵袭到膜下的细胞，然后用结晶紫或吉姆萨染液染色。

⑥计数和分析：

清洗掉多余的染料，在显微镜下观察并计数侵袭到膜下表面的细胞。

可以选择多个视野进行计数，并计算平均数。

①实验对照：设置未侵袭的细胞作为阴性对照，以及已知侵袭能力的细胞作为阳性对照。

②重复实验：每个实验条件至少重复三次，以减少实验误差。

③统计分析：使用适当的统计方法分析实验数据，如t检验或方差分析（ANOVA）。

1. 细胞类型，客户是否提供细胞，细胞能否进行Transwell检测，一般悬浮细胞不建议进行该实验；

2. 客户是否提供Transwell孔板；

3. 是否需要进行药物处理或敲除过表达处理，敲除或过表达处理是否提供相关载体；

4. 检测时间；

5. 客户是否提供基质胶。

1. 细胞株 400/株，贴壁细胞80元培养至6孔细胞量，悬浮细胞100元培养至6孔细胞量；客户提供300/株适应性培养1-2周；

2. 药物处理费用一个药物150，载体转染费用一个载体60；

3. 细胞侵袭费用250/细胞/处理。