细胞周期检测概述

细胞周期检测是用于分析细胞在不同细胞周期阶段（如G1期、S期、G2期和M期）的分布情况的一种实验方法。这种检测对于了解细胞的增殖状态、调控机制以及在某些疾病（如癌症）中的作用至关重要。细胞周期检测是细胞生物学和癌症研究中非常重要的工具，它有助于理解细胞增殖调控、药物作用机制以及疾病进展。

常用方法

1. 流式细胞术（Flow Cytometry）

①实验原理：

流式细胞术通过检测细胞DNA含量来区分细胞周期中的不同阶段。细胞在G1期和G2期具有二倍体DNA含量，而在S期DNA含量逐渐增加，M期时DNA含量暂时加倍。

②实验步骤：

i. 细胞固定：将细胞用70%乙醇在-20°C固定过夜。

ii. RNA酶处理：用RNA酶处理细胞，以去除RNA对DNA染色的干扰。

iii. DNA染色：使用碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）或其他DNA特异性染料进行染色。

iv. 流式细胞仪分析：将染色后的细胞通过流式细胞仪进行分析，收集荧光信号。

v. 数据分析：使用专门的软件根据DNA含量分布区分G1、S和G2/M期的细胞，并计算各期细胞的比例。

2. BrdU标记法

①实验原理：

5-溴脱氧尿嘧啶（Bromodeoxyuridine, BrdU）是一种胸腺嘧啶类似物，可以替代胸腺嘧啶在S期整合到新合成的DNA中。通过检测BrdU的掺入，可以确定细胞是否处于S期。

②实验步骤：

i. BrdU标记：将BrdU添加到细胞培养基中，让细胞在S期摄取BrdU。

ii. 细胞固定和透化：固定细胞并使其透化，以便抗体进入细胞内。

iii. BrdU检测：使用抗BrdU抗体进行免疫荧光或酶联免疫吸附试验（ELISA）检测。

iv. 数据分析：分析标记了BrdU的细胞比例，以确定S期的细胞比例。

3. EdU标记法

①实验原理：

与BrdU类似，5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶（5-ethynyl-2’-deoxyuridine, EdU）也可以被细胞在S期摄取并整合到DNA中。EdU的检测通常使用点击化学（Click Chemistry）进行，具有更高的特异性和灵敏度。

②实验步骤：

i. EdU标记：将EdU添加到细胞培养基中，细胞在S期摄取EdU。

ii. 细胞固定和透化：固定细胞并使其透化。

iii. EdU检测：使用点击化学反应和荧光标记的探针检测EdU。

iv. 数据分析：通过荧光显微镜或流式细胞术分析标记了EdU的细胞。

1. 细胞同步化：在某些情况下，可能需要对细胞进行同步化处理，以确保大多数细胞处于特定的细胞周期阶段。

2. 对照实验：设置未标记的细胞作为阴性对照，以确保检测的特异性。

3. 重复实验：为了确保结果的可靠性，每个实验条件应至少重复三次。

1. 细胞类型，客户是否提供细胞；

2. 是否提供PI试剂；

3. 细胞处理条件。

1. 细胞株 400/株，贴壁细胞80元培养至6孔细胞量，悬浮细胞100元培养至6孔细胞量；客户提供300/株适应性培养1-2周；

2. 药物处理费用一个药物150，载体转染费用一个载体60；

3. 细胞周期费用100细胞/重复，建议三重复。